вибір читачів
Популярні статті
СВГ набір для виділення і культивування гонококів. Живильні середовища для вирощування гонококів. Самостійна робота студентів
Цей агар з додаванням крові, гемоглобіну або інших добавок рекомендують для селективного виділення гонококів.
Склад **:
** Склад вивірено і доведений до відповідності необхідним параметрам
приготування:
Розмішати 7,2 г порошку в 100 мл дистильованої води, щоб приготувати середу подвійний концентрації. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (121 ° С) протягом 15 хв. Остудити до 50 ° С і асептично додати приготовані окремо 100 мл 2% -ного стерильного розчину гемоглобіну (FD022) і добавку GC (FD021). Ретельно перемішати і розлити в чашки Петрі. Для додання селективних властивостей в середу можна додати антибіотики, що входять в такі добавки: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).
Для приготування шоколадного агару готують середу звичайної концентрації, розмішавши 3,6 г порошку в 100 мл дистильованої води. Стерилізують, додають до 5% (об / об) стерильну Дефібриновану кров і прогрівають середу при 80 ° С протягом 10 хв.
Принцип і оцінка результату:
Даний агар з додаванням крові або гемоглобіну і інших добавок рекомендують для селективного виділення і культивування таких вибагливих мікроорганізмів, як гонококи і гемофільні бактерії. Johnston розробив шоколадний агар, на якому можна було протягом 24 год отримати зростання Neisseria gonorrhoeae(1). Пізніше інші автори (2) вдосконалили середу, ввівши до її складу гемоглобін.
Агар містить спеціальний пептони - джерело поживних речовин для мікроорганізмів. Крохмаль дозволяє нейтралізувати утворені Нейссер токсичні речовини, а фосфати протидіють зсуву рН в результаті утворення амінів, що також може позначитися на зростанні і життєздатності мікроорганізмів. Гемоглобін служить джерелом фактора Х для гемофільних бактерій. Інша добавка збагачує середу фактором V (НАД, ніконінамідаденіндінуклеотід), необхідним для гемофільної палички, а також амінокислотами, вітамінами, іонами заліза і т.п., що стимулює ріст патогенних нейссерий.
Чи не застосовуйте тампони з бавовни для збору матеріалу. Посів здійснюйте відразу після відбору матеріалу. Його треба зробити так, щоб були зони густого і рідкого зростання. Посів інкубують при 37 ° С в атмосфері 5-10% вуглекислоти і 70% вологості. Всі підозрілі колонії треба перевірити в біохімічних і / або серологічних тестах.
Контроль якості:
Зовнішній вигляд порошку:
Гомогенний сипучий світло-жовтий порошок.
Щільність готової середовища:
Утворюється среда, відповідна по щільності 1,0% -ному агарові гелю.
Колір і прозорість готової середовища:
Основа середовища має світло-жовте забарвлення, прозора або злегка опалесцирует. Після додавання гемоглобіну середовище стає шоколадно-коричневої і непрозорою, якщо в чашках Петрі формується гель.
Кислотність середовища:
При 25 ° С водний розчин (3,6% вага / об) має рН 7,2 ± 0,2.
Культуральні властивості:
Ростові характеристики референс-штаму через 40-48 год при 35-37 ° С на шоколадному агарі, приготованому на цій основі, в присутності в атмосфері 5-10% вуглекислоти і 70% вологості.
Ціна: на запит
Ви можете додати товар в корзину, вказавши кількість
Гонококи мають бобовидную форму, розташовуються у вигляді диплококков, оточені мікрокапсули, джгутиків не мають, спор не утворюють, аналогічно менінгоккам. У клітинній стінці є зовнішня мембрана, білки якої поділяють на три групи по їх функціональному значенням. Для гонококів характерно наявність пілей, які відрізняються один від одного за своїми антигенними властивостями (16 антигенних варіантів). Гонококи культивують на поживних середовищах, що містять нативний білок (сироватка крові, асцитичної рідина). Краще ростуть при утриманні 3-5% СО2. На асцітагаре утворюють прозорі колонії з рівними краями. З вуглеводів ферментують тільки глюкозу, утворюють каталазу і цитохромоксидазу - типові для нейссерий ферменти.антигени
Антигенна структура гонококів мінлива. Це пов'язано з наявністю численних антигенних варіантів пілей, які формуються в процесі розвитку інфекції.Патогенність і патогенез
Гонококи прикріплюються до циліндричного епітелію уретри, вагінальної частини шийки матки, прямої кишки, кон'юнктиві очі, а також сперматозоїдів і найпростішим (трихомонади, амеба). Адгезія відбувається за рахунок пілей і білків зовнішньої мембрани клітинної стінки. Характерною особливістю гонококів є їх здатність проникати в лейкоцити і розмножуватися в них. Ліпоолігосахарідная частина клітинної стінки токсично діє. Капсулярні полісахариди пригнічують фагоцитоз. З'єднуючись з ворсинками циліндричного епітелію слизової уретри, а у жінок і ендоцервікального каналу, гонококи проникають всередину клітин за участю білків зовнішньої мембрани клітинної стінки. Це призводить до розвитку гострого уретриту, цервіциту та поразки у жінок шийки матки, придатків (труби, яєчники), у чоловіків насіннєвих пухирців, передміхурової залози. При екстрагенітальної локалізації гонококи можуть пошкоджувати пряму кишку і мигдалини, а також викликати бленнореи (кон'юнктивіт) у новонароджених. Зараження відбувається під час проходження родових шляхів матері, хворої на гонорею.імунітет
При гонореї має місце гуморальний імунну відповідь. Однак утворюються антибактеріальні антитіла не мають протектівнимі властивостями. Протягом захворювання утворюються IgA, що пригнічують прикріплення пілей збудника до клітин слизової уретри. Однак вони не здатні захистити слизову від подальшого зараження іншими генераціями гонококів, що пов'язано зі зміною їх антигенної структури. Це призводить до реінфекції і рецидивів, а також до переходу захворювання в хронічну форму.гонококові інфекції
Збудник гонореї і бленореї N.gonorrhoeae (за попередньою класифікацією гонококк) належить до сімейства Neisseriaceae, роду Neisseria. В мазках з виділень хворих гонококи мають форму кавових зерен, грамнегативні, розташовуються парами як всередині лейкоцитів (незавершений фагоцитоз), так і поза клітинами. За своїми морфологічними ознаками вони дуже схожі менінгококів. Для гонококів притаманний поліморфізм - зустрічаються дрібні і великі клітини, рідко палочковидной форми.К поживних середовищ дуже вибагливі. Краще ростуть на середовищах, що містять кров, сироватку, асцитичної рідини. Гонококи містять протеїнові і полісахаридні антигени, за якими розділені на 16 сероварів, але в рутинних баклабораторія їх поки не определяют.Для мікробіологічної діагностики гонококових інфекцій використовують бактериоскопический, бактеріологічний, серологічний і алергічний методи.Взяття матеріалу для дослідження
Щоб гідно і доброякісно провести бактеріологічну і бактеріоскопічну діагностику, важливо правильно взяти клінічний матеріал. Його, як правило, повинен проводити врач.У чоловіків досліджують виділення сечівника, парауретральних ходів, прямої кишки, при показаннях - матеріал з ротоглотки, а також секрет передміхурової залози після її масажу. Можна також дослідити осад і "нитки" сечі, але в них гонококи виявляються значно рідше. Перед взяттям матеріалу з уретри хворий не повинен помочитися протягом 4-5 ч, не вживати антибіотики і дезінфікуючі розчини. Зовнішній отвір уретри спочатку протирають стерильним ватним тампоном, змоченим 0,85% розчином хлориду натрію, потім сухим тампоном. Мазки виготовляють не з гною, вільно витікає, а з матеріалу, взятого шляхом зіскрібка зі слизової уретри бактеріологічною петлею або спеціальною ложечкою Фолькмана. При незначних виділеннях необхідно зробити попередній масаж уретри. У жінок матеріал беруть з уретри, парауретральних ходів, шийки матки, прямої кишки, а за показаннями - і з ротоглотки. Спочатку очищають піхву від виділень, проводять масаж уретри і шляхом зіскрібка бактеріологічною петлею або ложечкою Фолькмана забирають матеріал. Шийку матки спочатку протирають сучим стерильним ватним тампоном для видалення слизової пробки. Виділення з каналу шийки матки беруть бактеріологічною петлею або пінцетом. Матеріал з дистального відділу прямої кишки беруть за допомогою ложечки Фолькмана сліпим методом ", тобто без будь-якої підготовки хворого, або за допомогою рекоскопа або ректального дзеркала. У цьому випадку досліджуваний матеріал забирають безпосередньо з видимого місця пораженія.Прі орофарингеальному гонореї слиз з ротоглотки беруть стерильними ватними тампонами на спеціальних власниках зі сталевого дроту. Для діагностики "Ленор виділення кон'юнктиви знімають бактеріологічною петлею. Рідко гонорея ускладнюється гоносепсісом, ендокардитом, артритом. Тоді матеріалом для юслідження служить кров або синовіальна рідина. Беручи до уваги високу - V тлівість гонококів до коливань температури, досліджувані матеріали доставляють в лабораторію в спеціальних термосах або сумках з грілкою.бактеріоскопічне дослідження
Бактеріоскопічне дослідження є найбільш поширеним, хоча і менш чутливим методом лабораторної діагностики гонореї та бленореї у порівнянні з виділенням-істіх культур. Це особливо стосується хронічного перебігу хвороби, коли в досліджуваному матеріалі міститься незначна кількість гонококів. Однак при правильному взяття матеріалу, повторних обстеженнях пацієнтів, застосуванні методів провокації, кваліфікованої оцінки мазків бактериоскопическое дослідження досить часто дає можливість швидко і правильно діагностувати заболеваніе.С досліджуваного матеріалу виготовляють два тонких рівномірні препарати-мазки. Один фарбують метиленової синькою, другий-за Грамом. При відсутності метиленового синього можна фарбувати один мазок 1% водним розчином кристалічного фіолетового або 0,5% розчином діамантового зеленого протягом 1 хв. Висновок про наявність гонококів роблять, грунтуючись на таких іхсвойствам: грамнегативні забарвлення, діплококова структура, форма кавових зерен, розташування всередині лейкоцітов.Под впливом антибіотиків і інших хіміопрепаратів а також при хронічній гонореї морфологія і забарвлення гонококів можуть змінюватися. Окремі клітини набувають різну форму і величину (так звані форми Аша). Крім того, в досліджуваному матеріалі можуть перебувати подібні гонококів грамнегативні коки з роду Veillonella. Це в деякій мірі обмежує діагностичну цінність методу первинної мікроскопіі.Лучшіе і надійні результати дає метод імунофлюоресценції. Тонкі мазки з виділень хворих фіксують у полум'ї пальника. На них наносять мічену ізотіоцианатом флуоресцеїну антігонококову сироватку на 1 годину при 35 ° С у вологій камері. Після цього мазки двічі промивають буферним розчином, наносять забуферений гліцерин і покривають покривною стеклами. При взаємодії гонококів з міченими антитілами під люмінесцентним мікроскопом видно характерне світіння навколо бактеріальних клітин.бактеріологічне дослідження
Показаннями до виділення чистих культур гонококів неодноразові негативні результати бактеріоскопії, наявність підозрілих по гонококів, але не ідентифікованих морфологічно мікроорганізмів, а також для достовірного встановлення вилікування захворювання. Дуже важливо негайно помістити посіви в термостат. При неможливості проведення посівів на місці взяття матеріалу можна висів ватним тампоном в пробірку з транспортним середовищем Стюарта, яке забезпечує збереження життєздатності гонококів під час доставки в лабораторію.Посеви проводять за стандартною схемою в один зі спеціальних поживних середовищ в пробірках або чашках Петрі (КДС, Бейлі , кров'яний або сироватковий агар, сухий живильного середовища Харківського підприємства "Біолік" по виробництву бактерійних та лікарських препаратів). Для діагностичного культивування гонококів у багатьох країнах використовують ще "шоколадний" агар. Найкращими є середовища, виготовлені на основі агару з кролячого м'яса або свіжих бичачих сердець. Додавання до них 20 ОД / мл поліміксину і 2 мкг / мл лінкоміцину значно підвищує частоту висіву гонококів, оскільки зазначені препарати пригнічують ріст інших бактерій. Всі середовища перед посівом підігрівають в термостаті протягом 15-20 хв. Чашки і пробірки з посівами поміщають в ексикаторі, де створюють атмосферу з 20% С02. Колонії, як правило, виростають через 18-24 год, однак можливий і пізній зростання. Тоді посіви витримують в термостаті (в ексикаторі!) До 8 діб, щодня перевіряючи появу роста.Колоніі гонококів, які виросли мають круглу, злегка опуклу форму, рівні краї, блискучу поверхню, слизову консистенцію. Вони прозорі, як крапельки роси, майже безбарвні, хоча можуть траплятися і білуваті варіанти. Отримані колонії досліджують макро- і мікроскопічно. В мазках гонококи розташовуються парно, тетрадами і скупченнями. Типові колонії пересівають на скошений сироватковий агар для виділення чистої культури. Остаточну ідентифікацію проводять, враховуючи морфологічні, культу ра ьні, ферментативні і антигенні властивості. Біохімічно гонококи мало активні. На сироваткових середовищах з 1,5% різних вуглеводів вони розкладають тільки глюкозу, але не мальтозу і сахарозу.Оксідазно активність виділених культур визначають шляхом нанесення на колонії (після мікроскопії) 1% розчину діметілпарафенілендіаміну. Оксідазопозітівні колонії спочатку червоніють а пізніше чернеют.Діфференціація гонококів від інших видів роду Neisseria має особливе значення при діагностиці орофарингеальной гонореї. Як відомо, на слизової мигдаликів, рото-і носоглотки постійно знаходиться велика кількість грамнегативних нейссерий - представників нормальної мікрофлори людини. Надійними методами ідентифікації гонококів є реакції імунофлюоресценції, латекс-і коаглютинації а також визначення ферментативних властивостей. Обов'язково проводять якісне визначення чутливості або резистентності мікроорганізмів до антибіотиків за допомогою методу дифузії в агар з використанням дісков.С метою підвищення частоти знаходження гонококів в мазках при первинній мікроскопії і більш надійного виділення чистих культур особливо у випадках млявого, хронічного перебігу захворювання вдаються до методів провокації гонореї , тобто штучного загострення патологічного процесу, в результаті чого в виділеннях з'являється більшу кількість гонококів. Основними з цих методів є: а) хімічний - инстилляция в уретру 0,5% розчину нітрату срібла у чоловіків, змазування каналу шийки матки 2-5% розчином нітрату срібла; б) механічне - введення прямого бужа в уретру на 10 хв, або проведення передній уретроскопии; в) біологічний - внутрішньом'язове введення гоновакцини в кількості 500 млн. мікробних тіл або пірогеналу 200 МПД; г) аліментарний - вживання солоної, гострої їжі; д) термічний - прогрівання статевих органів індуктотермічнім струмом; е) фізіологічний - взяття мазків під час менструацій.Еще краще комбінувати кілька методів провокації, наприклад, хімічний, аліментарний і біологіческій.В останнім часом для більш надійного виявлення збудника гонореї приймають полімеразної ланцюгової реакції. Вона дозволяє виявити збудника у випадках хронічної гонореї, коли бактеріоскопічне і бактеріологічне дослідження не дає позитивних результатів.серологічна діагностика
Серологічну діагностику гонореї здійснюють порівняно рідко, в основному, при хронічному її перебігу, коли бактеріоскопічне і бактеріологічні дослідження не дають позитивних результатів. В сучасних умовах проводять імуноферментний аналіз, РНГА і реакції Борде-Жангу (РСК). Антигенами для цих реакцій служать: убита нагріванням полівалентна гонококковая вакцина, вакцина, інактивована ультразвуком, протеїнові і полісахаридні фракції гонококів, а також піридиновий антиген. ІФА і РНГА є високоспецифічний і достовірними серологічними реакціями. У порівнянні з минулим РСК дещо втратила свою роль. Вона не має практичного значення при діагностиці гострої гонореї, оскільки її лікують ще до утворення значної кількості антитіл. Для встановлення достовірності лікування вона взагалі непридатна. Реакція Борде-Жангу має важливе значення при серодіагностіці хронічної гонореї, особливо при ускладнених його формах (гоносепсіс, метрит, артрит простатит і ін.). Діагностичне значення алергічних проб дещо знецінюється тим, що вони позитивні протягом багатьох років після перенесеної гонореї. Для їх постановки під шкіру вводять 0,1 мл свіжої гонококовою вакцини (100 млн мікробних клітин в 1 мл). Через 24 год спостерігають гіперемію, іноді з набряком в центрі.Лікування і профілактика
Для хіміотерапії гонореї використовують антибіотики: бета-лактами (пеніциліни, цефалоспорини) і інші антибіотики. Вакцинопрофілактика гонореї не проводиться через відсутність ефективних вакцин. Для попередження бленореї всім новонародженим закопують на кон'юнктиву ока розчин одного з перерахованих антибіотиків.Ефективність бактеріологічного методу дослідження в
значною мірою визначається якістю поживних середовищ. В
нашій країні найбільш широко апробовані і використовуються два види
поживних середовищ: асцит-агар і безасцітние поживні середовища.
Основою обох середовищ є мясопентонний агар (МПА) з м'яса
кроликів або свіжих бичачих сердець. Методика його приготування
полягає в наступному. М'ясо кролика звільняють від жиру і
сухожиль, пропускають через м'ясорубку або подрібнюють ножем,
зважують, заливають подвійним об'ємом водопровідної води і в такому
вигляді залишають в холодильнику при 4ё на добу для екстрагування.
Потім масу нагрівають до кипіння, кип'ятять 10 хвилин, охолоджують і
фільтрують через марлю. До фільтрату додають 2% агар-агар, 1%
пептона і 0,5% хлориду натрію, нагрівають до розчинення агар-агар
і встановлюють рН = 7,5-7,6 (подщелачивание виробляють 20%
розчином їдкого натрію). Середу доводять до кипіння, фільтрують
через ватно-марлевий фільтр, розливають по стерильним флаконах або
колбам і стерилізують в автоклаві 15-20 хвилин при 0,5 атмосфери по
манометру (112ё).
Техніка приготування МПА зі свіжих бичачих сердець та ж,
тільки кип'ятіння маси подрібнених сердець в воді слід
виробляти 20 хвилин замість 10.
Можливе приготування основи живильного середовища без пептона.
При цьому користуються вищевикладеної методикою приготування МПА, але
виключають з його складу пептони, подрібнене м'ясо кролика кип'ятять
5 хвилин замість 10 і стерилізують середу в автоклаві протягом 10
хвилин при 0,8 атмосфери по манометру (117ё).
Асцит-агар
Асцитичної рідина повинна бути отримана від хворих з
асцитом, причиною якого є серцева недостатність, і
виробляють через троакар в стерильну пляшку і додають до неї 5%
хлороформу для наркозу. Протягом 10 днів рідина перемішують з
хлороформом шляхом обертання бутлі, потім її залишають при
кімнатній температурі до повного осідання хлороформу на дно пляшки
і просвітління рідини. Після цього при необхідності прозору
асцитичну рідина розливають по 50 мл у стерильні колби з
ватними пробками і щодня протягом 3 днів їх поміщають в
водяну баню при температурі 56ё на 1 годину для випаровування хлороформу
через ватяну пробку. Після перевірки асцитичної рідини на
стерильність вона може бути використана для збагачення
живильного середовища для виділення гонокока в концентрації 1/3 і 1/4
обсягу середовища, що визначають дослідним шляхом.
Рецепти безасцітних поживних середовищ
1. МПА з кролячого м'яса або свіжих бичачих сердець
(РН = 7,4-7,5) - 100 мл, гідролізат казеїну для парентерального
білкового харчування - 2 мл, дріжджовий аутолізат - 2 мл, сироватка
крові великої рогатої худоби - 20 мл (середа КДС-1).
2. МПА з кролячого м'яса або свіжих бичачих сердець
(РН = 7,4-7,5) - 100 мл, 5% розчин гемогідролізата - 2 мл,
дріжджовий аутолізат - 2 мл, сироватка крові великої рогатої
худоби - 20 мл (середа ГДС-2).
3. МПА з кролячого м'яса або свіжих бичачих сердець
(РН = 7,4-7,5) - 100 мл, середа 199 для культур тканин без
антибіотиків - 20 мл, дріжджовий аутолізат - 2 мл, сироватка крові
великої рогатої худоби - 20 мл (середа 199-СДС).
4. МПА з кролячого м'яса або свіжих бичачих сердець
(РН = 7,4-7,5) - 100 мл, жовток свіжого курячого яйця - 10 мл,
сироватка крові великої рогатої худоби - 20 мл (середа ЖС).
Яєчний жовток отримують стерильно з дієтичних курячих яєць
безпосередньо перед приготуванням середовища. Для цього,
попередньо обробивши спиртом, шкаралупу розкривають стерильним
пінцетом і вміст яйця виливають в стерильну лійку. після
того як білок витече, що залишився в воронці жовток переносять в
стерильний посуд і мірної піпеткою беруть необхідний для
виготовлення живильного середовища обсяг жовтка.
Приготування дріжджового аутолізата полягає в наступному.
Пекарські дріжджі подрібнюють і закладають в бутель, що перевищує по
обсягом взяті дріжджі в 4 - 5 разів, і залишають для аутолиза на двоє
доби в сушильній шафі або термостаті при 60ё. потім густу
коричневу масу розбавляють потрійним об'ємом теплої водопровідної
води, добре перемішують і двічі центрифугируют по 10 хвилин при
1000 оборотів в хвилину (до просвітління рідини). надосадову
рідину зливають, додають до неї 0,5% хлористого натрію, доводять
рН до 7,4-7,5 і автоклавують 30 хвилин при 1 атмосфері по
манометру (120ё). Зберігають в дрібній розфасовці в холодильнику при
Дріжджовий аутолізат може бути замінений 1,5% розчином
екстракту кормових дріжджів (ЕКД) в тій же кількості (2 мл) 1,5%
розчин ЕКД готують в лабораторії з сухого ЕКД, розчиняючи його в
стерильної дистильованої воді. Приготований таким чином
рідкий екстракт розливають по стерильним пробірках і стерилізують в
автоклаві при 0,5 атмосфери по манометру протягом 20 хвилин.
У всіх вищевказаних поживних середовищах сироватка крові
великої рогатої худоби може бути замінена нормальної нативной
сироваткою для бактеріологічних поживних середовищ, яка
є тією ж самою сироваткою, але з додаванням консерванту.
Приготування збагаченої середовища
МПА, що знаходиться у флаконі або колбі, розтоплюють на водяній
бані, охолоджують до 56-58ё і додають до нього інгредієнти в
співвідношеннях, зазначених раніше в рецептах. Збагачений МПА по 3-3,5
мл розливають в стерильні пробірки, середу скошують і зволожують
0,5 мл стерильного мясопептонного бульйону або ізотонічного
розчину хлориду натрію після того, як вона застигне. Для перевірки
на стерильність середу поміщають в термостат при 35-37ё на добу.
Всі вищевказані безасцітние середовища, крім яєчної, прозорі,
на них легко диференціювати колонії мікроорганізмів. Понеділок,
збагачена яйцем, відрізняється мутностью, вона жовта, які виросли на
ній колонії, зокрема, гонококи, погано помітні. Однак зростання
гонококка на цьому середовищі рясний і його колонії легко можуть бути
виявлені шляхом обробки зростання 1% розчином
діметілпарафенілендіаміна або іншого реактиву на оксидазу,
який забарвлює колонії гонококка в червоний колір, добре
контрастує на жовтому фоні середовища. Використання желточной
середовища без обробки зростання мікроорганізмів реактивом на оксидазу НЕ
Якість кожної нової серії живильного середовища лабораторного
виготовлення необхідно перевіряти шляхом посіву на неї
патологічного матеріалу від хворих, у яких бактериоскопически
виявлені гонококи.
Термін зберігання МПА в холодильнику при 4ё не повинен перевищувати 1
місяць, збагаченої середовища - 7 діб.
У зв'язку з тим, що для вищевказаної середовища можливий малий термін
зберігання, розроблена методика виробничого виготовлення
ліофілізованої безасцітной живильного середовища, яка під
назвою "Поживна середу для виділення гонококів, суха"
випускається в двох флаконах: частина I (основа середовища) і частина II
(Збагачують речовини). Для приготування робочого середовища в частину I
потрібно додати 100 мл стерильної дистильованої води і підігріти
в водяній бані при 100ё до повного розчинення вмісту флакона
(В межах 30 хвилин). Зайвий час витримувати середу в водяній
лазні не слід, тому що це знижує її якість. У частину II вносять
24 мл стерильної дистильованої води (розчинення збагачують
речовин настає негайно). Потім при дотриманні умов
стерильності частина II переносять в охолоджену до 56ё частина I,
змішують, розливають по стерильним пробірках, скошують і
зволожують як описано раніше.
Суха Середовище готується з кролячого м'яса або бичачих сердець,
крім наведених в рецепті 1 (середа КДС-1) збагачують речовин
вона містить оротовую кислоту в концентрації 1 мкг / мл. середа
високої якості, зручна для використання в бактеріологічних
лабораторіях, тому що для перекладу сухого середовища в робочу потрібно
лише стерильна дистильована вода.
Використання безасцітной живильного середовища з додаванням
антибіотиків і оротової кислоти дає хороші результати при
бактеріологічної діагностики, в тому числі екстрагенітельной
гонореї: гонореї мигдалин і глотки, прямої кишки. антибіотики
додають для пригнічення росту супутньої гонококку
бактеріальної флори, що підвищує інтенсивність росту гонококка,
полегшує виявлення його одиничних колоній і виділення в чистій
культурі. Додають 20,0 ОД / мл поліміксину М сульфату і 6,2 ОД / мл
ристомицина сульфату; замість останнього можна використовувати
линкомицин гідрохлорид - 2 мкг / мл. Оротовую кислоту вводять в
склад живильного середовища в кількості 1 мкг / мл.
Для цього беруть навішення оротової кислоти 1 мг (1000 мкг) і
розводять в 1,0 мл стерильної дистильованої води (отримують
робочий розчин, що містить 1000 мкг який може зберігатися в
холодильнику протягом 10 днів) і стерилізують в водяній бані 15
хвилин, потім відбирають 0,1 мл отриманого розчину і додають до
100 мл збагаченої живильного середовища. Середу з антибіотиками
необхідно використовувати одночасно з середовищем без антибіотиків
(Одна пробірка з середовищем з антибіотиками, інша - без них), тому що
хоча і рідко, але зустрічаються штами гонокока, чутливі до
вищевказаним антибіотиків.
Середа збереження (транспортування)
Склад середовища збереження: 1) 1 літр дистильованої води,
вільної від хлору, 30 г агар-агар; 2) 900 мл дистильованої
води, вільної від хлору, 2 мл тіогліколовой кислоти, 12 мл 1М
розчину їдкого натрію, 100 мл 20% водного розчину натрію
фосфорнокислого однозамещенного, 20 мл 1% розчину хлористого
кальцію. Останню суміш (2) додають до свіжоприготованому
агар (1), доводять рН до 7,3-7,4, по 10 мл середу розливають в
стерильні пробірки, стерилізують текучою парою протягом 1 години.
Ватні тампони на дерев'яних паличках або стрижнях з
нержавіючої сталі діаметром близько 2 мм, вмонтовані в ватяні
пробки, кип'ятять 20 хвилин в фосфатному буфері, рН = 7,4, і
імпрегніруются протягом 24 годин в 1% водної суспензії тонко
подрібненого деревного вугілля. Після висушування ватні тампони
підправляють, вставляють в бактеріологічні пробірки
відповідного діаметру (рівного діаметру пробірок із середовищем) і
стерилізують в автоклаві 20 хвилин при 1 атмосфері (температура
Для приготування фосфатного буфера готують два розчини: 1
розчин - в 1 л дистильованої води розчиняють 28,4 г натрію
фосфорнокислий двозаміщений (0,2 М); 2 розчин - в 1 л
дистильованої води розчиняють 27,8 г лимонної кислоти (0,1 М).
Змішують 181,7 мл 1 розчину і 18,3 мл 2 розчину.
Виробництво посіву з використанням середовища збереження
здійснюється наступним чином. Лікар, Той, Хто хворого,
витягує з пробірки тампон, вводить його в осередок захворювання на
кілька секунд для просочування (можна зробити кілька
рухів за і проти годинникової стрілки), витягує його, не торкаючись
навколишніх предметів, в пробірку з середовищем збереження. поверх
ватної пробки пробірку закривають гумовою соскою. до відправки
матеріалу в бактеріологічну лабораторію посіви зберігають при 4ё
в холодильнику мінімальний термін, але не більше доби. одночасно
беруть патологічний матеріал і роблять мазки для
бактеріоскопічного дослідження, які направляють в
лабораторію разом з посівом. В бактеріологічній лабораторії
негайно після надходження тампони з патологічним матеріалом
виймають з середовища збереження і ними проводять посів по поверхні
скошеної живильного середовища в пробірках. Кожним тампоном роблять
посів на живильне середовище в двох пробірках. Посів по поверхні
живильного середовища слід проводити зигзагоподібними рухами
уздовж поверхні середовища, обертаючи тампон. Якщо діаметр пробірок зі
середовищем збереження і живильним середовищем аналогічний, можна тампон
після посіву залишити в другій пробірці в зіткненні з
живильним середовищем. Посіви поміщають в термостат і вирощують при
36-37ё в ексикаторі. Слід мати на увазі, що при використанні
середовища збереження зростання гонокока може наступити пізніше, ніж при
безпосередньому посіві патологічного матеріалу на живильне
Робота з культурами
Вирощування гонококів можна виробляти в пробірках або
чашках Петрі; перший спосіб забезпечує значну економію
середовища. Для підвищення відсотка висівання гонококів засіяні
поживні середовища поміщають в термостат в ексикаторі з 20%
реакції між сірчаною кислотою і бікарбонатом натрію: в ексикатор
об'ємом 5 літрів поміщають стакан з 50 мл 10% сірчаної кислоти, в
| Статті по темі: | |
|
урогенітальний хламідіоз
Хламідійна інфекція - венеричне захворювання (інфекція передається ... Левофлоксацин і Амоксиклав: порівняння засобів і що краще
Які антибіотики приймати при бронхіті у дорослих? Точну відповідь знайти ... L-Треонін Кормовий (L-threonine feed grade)
Сьогодні всім відомо, наскільки важливі для нашого організму сполуки ... | |
